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中药及中成药薄层色谱鉴别检验相关问题的探讨

1 薄层色谱在中药检验中的应用现状
 
薄层色谱法 (TLC) 为一种吸附薄层色谱分离法, 系指将样品点样于涂有相应固定相的玻璃板、塑料板片上, 利用样品中各成分的不同吸附能力, 使在移动相流过吸附剂的过程中, 连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附作用, 再利用吸收测定、荧光测定及荧光淬灭等方法最终分离各成分[1,2,3]。对比样品斑点及相应对照物的比移值 (Rf) , 以达到药品鉴别、化学成分含量测定及杂质检验等目的?赏狈掷攵喔鲅肥潜〔闵追ㄗ钗怀龅挠攀浦籟4], 此外, 薄层色谱法对样品预处理要求较低, 对固定相、展开剂的选择自由度较大, 十分适合样品中含有不易从分离介质脱附或含有悬浮微粒的分析和需要色谱后衍生化处理的样品分析。具有快速灵敏、简便直观、经济高效等优势, 在药物分析中应用较为广泛[5,6]。在中药及中成药的检验中亦被广泛应用, 是中国药典中中药饮片鉴别项的重要内容之一, 其最主要、最常用的目的是对中药中的有效成分进行定性鉴别。研究表明, 薄层色谱仪鉴别在现阶段药品质量标准定性鉴别中的应用已超越显微鉴别、理化鉴别和光谱鉴别[7]。
2 检验中存在的相关问题
2.1 点样量问题
 
点样是薄层色谱检验操作中最为关键的一步。亦是检验过程中最主要的误差来源。由于中药及中成药的供试液中待测成分与其他杂质成分共存, 在日常检验工作过程中, 如果出现结果不符合要求再检时, 为防止误判, 常采取点样量加倍的方式以排除杂质干扰等外力影响因素, 但如若对点样量超负荷认识不足, 点样量过大, 则会限制有效容积负荷量, 降低分离率, 对于较粘稠样品, 在点样量过大, 严重者甚至出现斑点变形、拖尾等情况发生, 影响结果判定。
2.2 供试品溶剂选择问题
 
由于供试液溶剂的洗脱力, 点样时样品在原点呈圆形展开, 这种现象称为“上样圆形色谱效应”[8]。但在实际操作中我们发现, 供试品溶剂极性的选择对薄层色谱鉴别检验影响巨大。如在点样后原点常变成空心圆, 这是由样品在溶剂中的溶解度过大所导致的, 这对于后续的展开将造成不利影响。另一种情况是点样后供试液溶剂在原点残留, 这会对展开的选择性产生一定的影响, 特别是供试液溶剂与展开剂的极性相差较大时更明显, 基于上述情况, 在上样时我们常采取同步或继后干燥除去原点残留的溶剂。总而言之, 在试验中一般应选用溶解度适中, 粘度较小的溶剂。
2.3 展开剂的选择问题
 
在试验中常选择极性相对小的溶剂进行成分的溶解和分离, 这一类溶剂在展开剂中所占比例一般较大;极性较大的溶剂因具有较强的洗脱力, 对待测成分的移动起到推动作用, 增大Rf值[9,10], 占比例一般较小, 展开剂中还常加入少量酸、碱来避免斑点拖尾。在同一薄层板上, 展开剂的展开能力取决于溶剂极性的大小, 展开剂极性越大, 对化合物的展开能力越强[11]。但由于操作人员对于上述理论知识的理解缺失, 在实际操作过程中对于展开剂的选择常常出现不当。
3 改进措施
 
总之在试验中我们发现点样操作技术、展开剂的选择、展开温度、湿度以及薄层板质量好坏等都是影响薄层色谱检验的重要因素。因此在中药及中成药的检验过程中常采取不同的提取方法, 调换展开剂, 进行空白试验等方式对检验结果进行验证[12]。具体总结以下几点:
 
对于液体剂型中成药, 应首先选择适宜的有机溶剂进行提取。对于水溶性成分应先对样品进行脱脂处理。对含有乙醇的样品应先水浴挥去乙醇再进行下一步处理。对固体剂型中成药, 应以超声提取法、回流提取法作为提取的首选方式。对药材或处方中含有较多糖类或淀粉质成分, 可采取先用酸性溶剂溶解, 再选择有机溶剂提取的方法提高薄层斑点的清晰度。
 
适时干燥除去原点残留的溶剂是必要的, 但应避免高温加热, 抑制硅胶的活性表面固态化学反应, 避免移动相在展开时对这部分样品的溶解速度比移动速度慢得多而形成拖尾。
 
展开后部分样品需用显色剂进行显色, 如果喷雾显色, 要保证喷出气雾尽量均匀。在用碘水或氨蒸气显色时, 使用的容器必须密闭, 熏蒸的时间要足够长, 待薄层斑点显色适宜时取出。加热显色需注意加热时间和温度。
4 结语
 
相信随着薄层技术在色谱板、点样技术、展开技术方面的发展, 薄层色谱的规范化和仪器化程度大大提高, 将在中药及中成药的检验分析中将发挥更大的作用。
 
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